Florida. La guerra entre España y Francia se había extendido a Sudamérica y el Caribe, y ambas naciones volvieron su atención hacia el sureste porque estaba paralelo a la ruta que seguían los galeones españoles a su regreso a España. Los líderes franceses conocían la leyenda de Chicora y se concentraron en las tierras bajas del sur como el sitio para su próximo intento de construir una colonia. En 1562, el líder protestante Jean Ribault partió del puerto de Le Havre con dos barcos, una tripulación de marineros experimentados, soldados veteranos y algunos nobles. Cuando avistaron Florida, vieron una tierra que no había sido visitada por los europeos durante casi veinte años. Girando hacia el norte, Ribault aterrizó su partido cerca de la actual Jacksonville, donde la población de Mississippian de la región dio la bienvenida a los recién llegados. A cambio, Ribault obsequió a su jefe con una túnica azul decorada con la flor de lis francesa. Al ver las joyas de oro que llevaban los indios, que habían recogido de los naufragios, y al confundir las orugas de las tiendas con gusanos de seda, los franceses creyeron que por fin habían encontrado la rica tierra de Chicora. Ribault pasó las siguientes semanas navegando hacia el norte, comerciando con la población local y cartografiando las distintas bahías y ríos. Encargado de solo explorar la región, él y sus hombres decidieron no obstante construir un asentamiento que llamaron Charlesfort en la actual Port Royal, Carolina del Sur. Cuando Ribault se embarcó para Francia, dejó a treinta hombres para proteger el paraíso hugonote. Los colonos, sin embargo, no sabían cómo alimentarse y pronto se enredaron en una relación con un cacicazgo cercano por el cual recibían comida a cambio de bienes como cuentas, espejos, telas y metal. Pero no fue suficiente. El hambre engendró conflictos internos y los colonos pronto empezaron a pelear. En 1564, los hombres habían tenido suficiente y decidieron construir un barco y navegar de regreso a Francia. El viaje fue duro; la comida se agotó; y canibalizaron a un miembro de la tripulación para sobrevivir, pero justo cuando la costa de Francia apareció a la vista, un barco inglés se acercó al barco que goteaba y el capitán apresó a los prisioneros en nombre de la reina Isabel I.
Viaje de Laudonnière. Cuando Ribault regresó a Francia, encontró a los católicos y hugonotes una vez más en guerra, por lo que fue a Inglaterra para solicitar apoyo para Charlesfort. La reina Isabel I simpatizaba con la causa protestante, pero decidió encarcelar al francés. Mientras tanto, en Francia, René Goulaine de Laudonnière asumió el mando del esfuerzo hugonote para fundar colonias, y en 1564 él y su tripulación partieron hacia Florida. Navegó con tres barcos y un grupo de caballeros hugonotes, jornaleros, artesanos, algunas mujeres y algunos africanos libres. El grupo de Laudonnière aterrizó cerca del sitio de Charlesfort, y un grupo de cuatrocientos indios salió a recibirlos. El hilo de la conversación, escribió un francés, se centró en hacer una alianza:
“Se sentaron juntos e hicieron carteles para expresarle al Sr. de Laudonnière lo felices que estaban de haber venido. . . y que debía ir a la guerra con ellos contra sus enemigos. . . . " El jefe local Saturnia, sin embargo, comenzó a sospechar de los franceses, mantuvo negociaciones con Laudonnière y, fiel a la diplomacia de los nativos americanos, persuadió al francés de hacer del asentamiento de Fort Caroline un tributario de su jefatura y de proporcionarle apoyo militar en caso de que surgiera la necesidad. . Saturnia no esperó mucho para llamar a sus nuevos aliados en busca de su apoyo en una guerra contra un cacicazgo vecino, pero Laudonnière se arrastró y renegó del trato que había hecho. Alejados de sus aliados nativos, sin poder encontrar ningún tesoro y sin la comida adecuada, los colonos se sintieron insatisfechos. Tres motines disiparon los recursos de la colonia y notificaron a los españoles que los franceses estaban asentados en su propio patio trasero. Ribault, después de su liberación de Inglaterra, regresó a la colonia con varios soldados y una orden de relevar a Laudonnière, pero no pudo restaurar el orden en la colonia. Poco después de su llegada aparecieron en el horizonte las velas de una fuerza española liderada por Pedro Menéndez de Avilés. A finales de 1565, sus tropas exterminaron a los hugonotes, destruyeron Fort Caroline y continuaron sus esfuerzos por colonizar Florida.